То, что было создано по Create, надо удалять по Free. При этом освобождается память объекта (экземпляра класса), а список (WorkListBox.Items.Objects) хранит только адреса. После удаления туда надо записать nil, (потом наличие объекта можно проверять по функции Assigned(<указатель>). Либо, как в твоём примере, удалить указатель:
Код:
(WorkListBox.Items.Objects[1] as Ob1).Free;
WorkListBox.Items.Delete(1); // или Objects[1]:= nil;